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组培污染率高怎么办?木木教你如何降低植物组培的污染率

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如何降低植物组培的污染率

在组培技术日趋成熟的今天,越来越多的公司、企业甚至个人选择利用组培技术进行生产化育苗,但在组织培养中通常会出现不同程度的污染。污染不仅会对植株造成伤害,增加接种源及污染的机率,而且会造成很大的经济损失。因此,在市场竞争中,如何降低组织培养的污染率是工厂化生产不可忽视的技术环节。

首先,让我们来了解一下污染的来源。植物组织培养污染主要是由霉菌、细菌和酵母菌引起的污染。霉菌和酵母菌在培养条件下生长快,容易观察到,而细菌潜伏期长,植物组织一般不表现症状,所以很难在前期用肉眼观察到。细菌污染的来源主要有:材料内部灭菌处理不好、内生菌的存在、寄生植物的污染。有些植物的昆虫和螨虫的体表带有霉菌的孢子和细菌,在九、十月份是重要的污染源,因多种植物昆虫处在大量繁殖阶段,此时大量昆虫造成的污染源最易造成组培污染的严重发生。另外,随着植物材料年龄的增长,植物材料的健康状况不断恶化,组培污染也更加严重;其次环境条件和操作过程也是引起污染的主要原因。

木木组培根据多年的从业经验,针对“如何有效降低植物组织培养的污染率”为题,与组培好友共同分享与探讨。


01

整个组培室的规划设计要合理。

有菌区和无菌区要进行严格的区域划分隔离,减少非必要的进出通道,控制污染源;如果培养室面积过大,要分割成若干面积较小的独立的培养室,这样一旦发生污染,可以形成有效的控制范围,减少损失;在接种室和培养室要设置一定面积的缓冲间,并且原则上缓冲间的门和功能室的门尽量避免在同一个方向。


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02

配备一定数量的灭菌设备并定期检查。

按生产环节来说,配置培养基的水要保证是无菌的蒸馏水;进行培养基灭菌时要保证灭菌温度和压力,尤其注意当灭菌锅达到规定的温度和压力之后要保证灭菌时间;接种室的超净工作台的初效过滤网要及时清洗,要定期检查超净工作台的高效过滤器的滤膜是否需要更换,接种过程中要对接种工具进行消毒避免交叉感染;接种室和培养室都要配备一定的灭菌设备定期进行室内环境的整体消毒杀菌,最大限度确保无菌区的洁净程度符合生产要求。


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03

制定科学合理的组培室无菌操作规程。

在无菌操作过程中,工作人员严格按照无菌操作的要求,规范熟练地完成好每一个步骤,能有效地减少由操作引起的污染。具体要求如下:

一、接种前,工作人员的双手必须用肥皂水洗净,进入接种室后换上工作服、戴上口罩,用75%的酒精擦拭消毒双手;

二、用75%的酒精擦拭超净工作台,接种工具(如剪刀、手术刀、镊子等)使用前要在75%酒精中浸泡,再在火焰上灼烧,冷却后使用;

三、在超净工作台上正确摆放接种用具、培养材料和培养基,台面上的东西不能堆放太多,以免影响气流;

四、接种过程中应避免他人来回走动,操作人员禁止谈话,并尽量避免操作人员头部伸入超净工作台的工作区内;

五、培养瓶的开启、接种材料的切割、分装、封口等步骤要规范熟练,避免交叉污染;

六、每切割、转接完一瓶母种材料后,要及时更换无菌纸,重新更换所用的接种工具,最好备两套交替使用。


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04

其他注意事项:

一、配备相应的化学试剂进行必要处理。在生产过程中,如有必要,可在培养基中加入适量的抑菌剂以控制污染。

二、在继代培养时一定要仔细检查,避免对污染的材料进行扩大增殖。

三、定时对培养基进行观察,出现污染状况要进行及时清理。


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