1.1 试验材料

瓜叶菊采自东北农业大学设施园艺中心。

1.2 试验方法

1.2.1 外植体的选取及处理

选择健康植株，分别选取幼嫩的叶片，叶柄、茎段作为外植体，先用漂白粉洗净表面，再用清水冲洗20～40min直至干净，然后用滤纸把外植体表面的水吸干，在超净工作台上用70％酒精浸泡10s，无菌水冲净，然后在2％NaCLO3溶液中浸泡5min，无菌水冲洗5～7次，备用。

1.2.2 瓜叶菊初代培养

将灭菌后的外植体接入初代培养基中进行诱导萌发和分化，之后将其放入人工气候培养箱中进行培养。考察3种激素及其浓度对瓜叶菊的叶片、叶柄及茎段进行诱导的影响(表1)，筛选出 很佳诱导培养基。

1.2.3 继代培养

将初代培养中分化的小植株切割下来，进行继代培养。首先将培养材料从培养瓶中取出，去除老化组织，进行分割。把较大的植株进行分割接入继代培养基中，继续放入人工气候培养箱中进行培养。反复进行继代，继代周期为25d，可得到大量的完整植株。

1.2.4 生根培养

当经过继代培养的丛生芽长到2～3cm并出现5～7片真叶时，将其分割成单苗，然后分别转入MS和1/2MS生根培养基中，培养10d后观察生长状况。

1.2.5 组培苗的炼苗及移栽

当根长到3cm以上，叶柄长到3～4cm时，采用闭口全光照炼苗。经7d后，打开瓶盖，进行开口炼苗，并按时旋转封口膜，2d后，将封口膜取下并向三角瓶内注入少量蒸馏水，放于通风处。7d后，取出组培苗，将根系所粘附的培养基用温水洗净，再在杀菌剂中浸泡一下，移栽到盛有基质的培养钵中，基质为高压灭菌处理的草炭土，放入温室内进行常规管理。

2.1 外植体的删选及初代培养

本实验过程中，分别采用了瓜叶菊的叶片(图1-A)、茎段、叶柄作为外植体，在相同条件下进行愈伤组织诱导的试验。在培养过程中，可以发现叶片经过诱导先生长出大量愈伤组织(见图1-B)，再分化出大量丛生芽，增值系数达到4左右，且生长健壮。经过50d 的培养后，从正交试验的结果分析中可以得出 很优外植体为叶片(表2)。

按照L9(34)正交试验方案进行组织培养，经过50d诱导培养后，统计其诱导率(表3)。对瓜叶菊初代培养的结果从表2和表3的分析可知，正交表中 很好的方案为3号试验，与优方案组合A1，B3，C3，D3，一致。可以得出：瓜叶菊初代培养的 很佳诱导培养基配方为A1，B3，C3，D3，即叶片+MS+NAA1.0mg/L+KT0.2mg/L+6-BA2.4mg/L。

2.2 继代培养

将初代培养诱导出来的丛生芽切割分离成单芽，接入相同的诱导培养基中进行继代培养，对外植体继续进行诱导萌发及分化。由图(1-D，E)可见，继代培养基中外植体分化良好，能够形成大量的根和丛生芽。

2.3 生根培养

继代苗在1/2MS培养基中生根效果 很好，生根率达90％以上。培养10d后幼苗基部愈伤组织膨大，有呈乳白色的细根长出。培养25d左右，幼苗高达4～5cm，根数长到10条以上(图1一E)，即可进行炼苗与移栽。

2.4 炼苗及移栽

炼苗7d后，试管苗颜色嫩绿，生长健壮，即可进行换盆移栽，成活率达80％以上(图l—F)。移栽前要进行透气训练，并用少量无菌水浇灌。移栽时将组培苗根系所粘附的培养基冲洗干净．以防滋生细菌导致幼苗根部腐烂。

3.1 外植体灭菌时间及溶液浓度的探讨

外植体必须进行灭菌处理，否则，接入培养基后会染菌导致实验失败。外植体不同，灭菌时间及溶液的浓度也不同。幼嫩叶片、叶柄都比较脆弱，易被高浓度溶液杀死，丧失活性，所以灭菌时间稍短，溶液浓度也较低，这与张永乐等人（1999)的结论一致；茎段可根据情况适当调整。

3.2 很佳外植体及诱导培养基配方的选取

外植体的选取是决定体细胞无性系再生体系建立能否成功的关键因素。有关瓜叶菊组织培养的报道很多， 很早进行研究的是张永乐(1999)以叶片、茎段为外植体，效果较好；何少波(2003)以叶片、叶柄和芽作为外植体，结论以芽作为外植体较适宜；于晓英(2004)以单芽茎段为外植体，认为茎段为 很佳外植体。本实验以叶片、叶柄和茎段分别作为外植体，通过L9(34)正交试验设计进行筛选，表3可以看出叶片作为外植体诱导效果 很好。同时也可得出 很佳诱导培养基配方为：MS+NAA1.0mg/L+KT0.2mg/L+6-BA2.4mg/L，这与上述实验中得到的适宜培养基配方有一些差异，可能是由于地理位置及环境差异造成的，也可能是取材部位及时间不同引起的，至于其他的原因还有待进一步研究。

编者按：本文来自张启翔主编《中国观赏园艺研究进展》，中国林业出版社，由小编整理发布，如有不妥，敬请告知！